流式细胞术是一种利用流式细胞仪对快速直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行多参数、快速定性和定量分析的技术。该技术拥有快速检测、丰富测量指标、大量数据采集、全面分析、高纯度分选及灵活方法等优点。为了帮助大家在流式实验中避免常见问题，鸿运国际为您总结了实验过程中可能面临的三大问题及其对应的解决方案。

一、无信号或信号弱

在流式细胞术中，检测结果无信号或信号过弱可能有以下原因及相应解决方案：

• 抗体存储不当：抗体应保存在2-8℃中，避免光照及反复冻融。
• 抗体过期使用：确保所使用的抗体在保质期内。
• 过度固定：优先选择新鲜样本，可通过预实验确定适合的固定剂和条件。
• 荧光染料淬灭：染色完成后要快速上机，并避光保存染色后的样本。
• 自发荧光较高：通过空白对照确定自发荧光水平，并根据荧光素强度和干扰程度选择合适的抗体染色时间及温度。

二、荧光强度过高

如果实验中出现荧光强度过高的现象，可能是由以下原因造成，解决方案如下：

• 染色时间过长：参考说明书，适当调整抗体染色时间。
• 抗体浓度过高：通过滴定抗体以确定最佳浓度。
• 补偿设置不当：尽量选择发射光谱不重叠的染料，确保每种荧光染料的信号正确补偿。
• 洗涤不充分：优化洗涤步骤，增加洗涤次数。

三、背景噪音高

高背景可能影响实验结果，其原因及解决措施如下：

• 死细胞和粘连体非特异性结合：使用新鲜样本和死活染料，确保细胞准备为单细胞悬液。
• 染色时间过长：根据实验情况调整抗体染色时间，参考说明书。
• 过度固定：选择新鲜样本并通过预实验确定合适的固定剂和条件。
• 自发荧光：使用空白对照监测自发荧光，并确保补偿设置正确。

在流式细胞实验中，结果可能受到多种因素的影响，如抗体选择、样本准备、实验操作及仪器设置等。鸿运国际希望以上指导能够帮助您顺利解决实验中的常见异常情况，获取满意的实验结果。欲了解更多流式实验相关知识，欢迎关注鸿运国际的最新动态！