鸿运国际的细胞介导的细胞毒性原理是一种重要的生物学现象，主要特征是免疫系统能够使体内受损的细胞被有效地溶解。为了深入研究细胞的生长控制与死亡机制，区分活细胞与死细胞的能力显得尤为重要。活/死细胞双重染色试剂盒为细胞活力的评估提供了一种便利的测定方法，采用双探针技术同时测定活细胞与死细胞，基于细胞健康的两个关键指标：质膜完整性和细胞内酯酶活性。

本试剂盒利用可以穿透细胞膜的绿色荧光染料Ca-AM（Ex/Em=488/530nm）对活细胞进行标记，同时使用不可穿透细胞膜的红色荧光染料PI（Ex/Em=535/617nm）对死细胞进行染色。

鸿运国际的实验准备工作包括：自备耗材如24孔板、可调式移液枪及枪头、离心机、荧光显微镜或流式细胞仪，以及去离子水和PBS溶液。具体的试剂准备如下：

• Ca-AM: 在冰上避光保存。
• PI: 在冰上避光保存。
• 1×AssayBuffer: 将10×AssayBuffer稀释至1×，使用前加热至37℃。
• StainingSolution: 每1mL AssayBuffer中加入1µL Ca-AM和1µL PI，按样本数量比例放大。

实验步骤如下：

A. 流式细胞术定量

1. 用预期方法处理细胞；注意：建议将未染色的对照组细胞悬浮在1×AssayBuffer中（不含Ca-AM和PI），以备流式细胞分析。
2. 对于非贴壁细胞，收集1-5×10⁵个细胞，离心（4℃,300g,5min），用预冷的PBS洗涤两次，弃去PBS；对于贴壁细胞，先用胰蛋白酶（不含EDTA）消化后再离心。
3. 在500µL StainingSolution中悬浮细胞。
4. 于37℃避光孵育15-30分钟。
5. 用流式细胞仪进行分析。

B. 荧光显微镜检测

1. 对于悬浮细胞：按照步骤A1到A4进行流式细胞术，将细胞悬浮液放在载玻片上，覆盖上玻璃盖，尽快使用适当的滤光片通过荧光显微镜进行分析。
2. 对于贴壁细胞，建议方案如下：
   1. 在六孔板的盖玻片上培养细胞，置于37℃ CO₂细胞培养箱中至少24小时，随后进行后续实验。
   2. 用预期的方法处理细胞，建立无诱导剂的阴性对照组。
   3. 用PBS洗涤细胞两次。
   4. 将0.5mL StainingSolution加入细胞中，避免光照下于37℃孵育15-30分钟。
   5. 再次用PBS洗涤细胞两次。
   6. 把盖玻片覆盖到载玻片上，尽快使用适当的滤光片通过荧光显微镜分析细胞。

请注意，PI是一个潜在的诱变因子，在使用本试剂时应采取适当的防护措施；Ca-AM需在干燥、低温、避光条件下储存，储存温度为-20℃。

相关产品：

• Catalog No: KTA2020 - 细胞周期染色分析试剂盒
• Catalog No: KTA1002 - 活细胞示踪试剂盒（绿色荧光）

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