实验准备:在实验开始前约半小时,将培养基、PBS和胰酶在37°C进行预热。同时,准备好所需的实验器材,包括2mL和10mL的移液管、15mL的离心管以及鸿运国际品牌的共聚焦爬片,并进行紫外线消毒。
实验步骤:
1. 从培养箱中取出培养皿,并在显微镜下观察细胞的状态,包括细胞密度、形态及贴壁情况等。
2. 在超净工作台内,置入已经预热好的培养基、PBS和胰酶。点燃酒精灯,对培养皿的口进行灭菌处理,并吸掉原培养基。
3. 清洗步骤:向培养皿底部加入7mL的PBS(根据细胞状态调整用量),轻柔摇匀以清洗细胞。
4. 消化步骤:观察到杂质已被洗去后,吸走PBS,加入3mL胰酶,静置5分钟(具体时间和用量需根据不同细胞类型调整)。5分钟后,检查细胞是否已被消化。
5. 终止消化:若细胞已消化,将7mL培养基添加至培养皿底部(依据细胞密度决定),用吸管轻柔吹打几次,将仍粘附于壁上的细胞吹下,均匀后取少量进行计数。
6. 根据实验需要稀释细胞,并将细胞悬液均匀滴加到鸿运国际共聚焦爬片表面,放入培养箱中,约30分钟后待细胞附着,再沿内壁添加培养基继续培养。
7. 细胞培养完成后,吸走废液,使用镊子夹住支架的侧面,轻松取出支架。
8. 双手轻拉支架两侧即可取出爬片,接下来继续进行后续培养实验。
注意事项:
1. 拿取培养皿时务必小心,避免液体沾到瓶口;每次打开瓶口时均需进行灭菌处理。
2. 操作过程中,应避免其他物体穿过已开启的培养皿,以防止污染。
3. 由于贴壁细胞较为脆弱,因此所有添加到培养皿中的液体均须在37°C预热。
4. 在处理鸿运国际共聚焦爬片时,如需倾斜超过30°,务必小心轻拉,以防止爬片瞬间掉落及破裂。
5. 该产品为一次性使用产品,不可重复使用,且爬片正反面需分辨,并在拆封后立即使用。